طراحی کنترل داخلی واکنش زنجیره ای پلیمراز باکتری مایکوپلاسما به روش رقابتی
نویسندگان
چکیده
چکیده سابقه و هدف: مایکوپلاسماها مهمترین و جدی ترین آلوده کننده های فرآورده های بیولوژیک تولیدی در کشت های سلولی می باشند. تکنیک pcr جهت شناسایی سریع جنس مایکوپلاسما، از اولویت بالایی برخوردار است. اما یکی از معایب این روش، نداشتن کنترل داخلی است. هدف اصلی این مطالعه، استاندارد کردن تست pcr تشخیص جنس مایکوپلاسما از طریق ساخت کنترل داخلی به روش رقابتی است. مواد و روش ها: با استفاده از پرایمرهای ویژه ی هدف 16s rrna، تست pcr جهت تشخیص مولکولی جنس مایکوپلاسما بهینه شد. پرایمرهای مرکب (composite primer) برای کنترل داخلی با استفاده از پرایمرهای ژن کینتوپلاست انگل لیشمانیا طراحی و سپس قطعه ی کنترل داخلی تکثیر گردید. هر دو محصول هدف و کنترل داخلی بعد از خالص سازی به پلاسمید ptz57 r اتصال و سپس در باکتری اشرشیا کلی jm107 ترانسفورم و نهایتاً کلون گردید. یافته ها: اندازه ی محصول تشخیصی و کنترل داخلی به ترتیب 272bp و 672bp بود، که از نظر اندازه، اختلاف مطلوبی با هم داشتند. تعداد حداقل کنترل داخلی در هر واکنش، 1000 عدد تعیین شد. حساسیت تست pcr برای تشخیص جنس مایکوپلاسما، 10 باکتری به دست آمد. در تست ویژگی با عوامل مختلف، هیچ محصول ناخواسته ای مشاهده نشد. طیفی که در آن تکثیر کنترل داخلی مشاهده شد، بین صد تا ده میلیون باکتری بدست آمد. نتیجه گیری: در کنار سرعت و دقت بالای تکنیک pcr، نتایج منفی و مثبت کاذب که به دلیل وجود مهارکننده های واکنش pcr رخ می دهند، می تواند کارایی این روش را کاهش دهد. استفاده از یک dna دیگر به عنوان کنترل داخلی می تواند این خطاها را شناسایی کند.
منابع مشابه
طراحی کنترل داخلی واکنش زنجیره‌ای پلیمراز باکتری مایکوپلاسما به روش رقابتی
چکیده سابقه و هدف: مایکوپلاسماها مهمترین و جدی‌ترین آلوده‌کننده‌های فرآورده‌های بیولوژیک تولیدی در کشت‌های سلولی می‌باشند. تکنیک PCR جهت شناسایی سریع جنس مایکوپلاسما، از اولویت بالایی برخوردار است. اما یکی از معایب این روش، نداشتن کنترل داخلی است. هدف اصلی این مطالعه، استاندارد کردن تست PCR تشخیص جنس مایکوپلاسما از طریق ساخت کنترل داخلی به روش رقابتی است. مواد و روش‌ها: با استفاده از پرایمرهای ...
متن کاملشناسایی کلستریدیوم سپتیکوم به روش واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR)
li . a3"9rl aiL,;.61'l,.lo95g9s,r";lo.r;'l,q,Jtaer{J*-;*J5O+.t1r (PCR) al:9, .,rat5':.1"ri+.ltL" : g rb .a991la.iL;.5$.ir 95 2g;,r, A 9; *a llo'r,il.spyl.;-*l5ar-9ulA :ba!9al u9fe,rrl.lhrl ol..id4jlpbd I . 6.r^ir95o;U g9s'tn 31 6 tl ty. * y; : t;' 9 t l, PCR pt+l .bte-;IDNA 6l.g*l ,LJ:.1;"-J5d;t h+i5lt.#t^i .A.J'-6Jij j4'f.i 1l o'& u>lp uet a3l.5b.rol;;l osl'i;rl {f fupt{tl*J5 t;*Sl 9a:-...
متن کاملتشخیص و ردیابی مایکوپلاسما سینوویه از مرغداری های صنعتی بااستفاده از روش واکنش زنجیره ای پلیمراز بر اساس ژنvlhA
مایکوپلاسما سینوویه مهمترین عامل بیماریزا در ماکیان است و همه سالهخسارات اقتصادی قابل توجهی را متوجه صنعت طیور در ایران می سازد. مایکوپلاسما سینوویه قادر به بیان لیپوپروتئین هماگلوتینین متغیرvlhA Variable lipoprotein hemagglutinin A می باشد که نقش مهمی در ایجاد بیماری ایفا می کند. هدف اصلی این مطالعه تشخیص و شناسایی جدایه های مایکوپلاسما سینوویه بر اساس ژنvlhA بود. از گله های طیور صنعتی سه اس...
متن کاملجستجوی ژنومی کوکسیلا بورنتی در شیر گاو به روش واکنش زنجیره ای پلیمراز آشیانه ای، ایران
زمینه و اهداف: تب کیو بیماری تبدار ریکتزیائی است که ممکن است با نشانههای ناگهانی مانند لرز، درد پشت چشم، ضعف، کسالت و تعریق شدید تظاهر نماید. با توجه به اینکه این باکتری در دامها شایع هست و امکان انتقال این باکتری از طریق شیرهای آلوده وجود دارد، این مطالعه با هدف تعیین میزان شیوع کوکسیلا بورنتی در نمونه هائ شیر خام جمعآوری شده از گاوهای شیری عجب شیر – ایران انجام گردید. مواد و روش کار: این ...
متن کاملبررسی ژن مقاومت دارویی در تریکوموناس واژینالیس به روش واکنش زنجیره ای پلیمراز
سابقه و هدف: باتوجه به اهمیت تریکومونیازیس و تناقضاتی که در مورد شیوع مقاومت دارویی آن در دسترس می باشد، این مطالعه به منظور تعیین میزان شیوع ژن مقاوم به داروی مترونیدازول در تریکوموناس واژینالیس به روش PCR- RFLP در شهرهای تهران و کاشان صورت گرفت.مواد و روش ها: در این مطالعه توصیفی 140 نمونه از ترشحات واژن جمع آوری شده و پس از جداسازی انگل با استفاده از محیط کشت دورسه و استخراج DNA واکنش PCR ا...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
پژوهندهجلد ۲۰، شماره ۲، صفحات ۱۰۴-۱۱۱
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023